Freelite® supone un gran paso adelante para la detección y monitorización del Mieloma Múltiple (MM) y otras discrasias de células B. Freelite fue desarrollado por Binding Site para medir las cadenas ligeras libres lambda y kappa. Nuestra experiencia en la fabricación de anticuerpos nos ha permitido crear un análisis, cuantificable, altamente específico y automatizable de cadenas ligeras libres en suero.
Ahora hay evidencias clínicas significativas a favor de los análisis de cadenas ligeras libres en suero Freelite® para el screening inicial de gammapatías monoclonales, la identificación de pacientes con amiloidosis primaria y mieloma múltiple no secretor que no fueron detectados por las electroforesis convencionales, como indicador pronóstico de la progresión del mieloma, para la estratificación del riesgo de los pacientes con Gammapatía Monoclonal de Significado Incierto (GMSI) y para la rápida evaluación de la eficacia de un tratamiento.
Freelite® es un marcador sensible y específico de cadenas ligeras libres (CLLs) en suero y proporciona la medición cuantitativa de:
- Kappa libre en suero
- Lambda libre en suero
- Relación Kappa/Lambda libre en suero
La relación de cadenas ligeras libres en suero es un fuerte indicador de la monoclonalidad y puede ayudar a distinguir una respuesta policlonal de una monoclonal.
En 2009 el International Myeloma Working Group public las guías que recomiendan la determinación de las concentraciones de cadenas ligeras libres en suero como ayuda para el diagnóstico, pronóstico y monitorización de los pacientes de mieloma múltiple.
Los consejos están basados en los resultados obtenidos de exhaustivos ensayos clínicos en los que se usaron los ensayos policlonales Freelite®.1
Las recomendaciones clave son:-
- Uso del análisis de CLLs en suero en el screening
- Uso del análisis de CLLs en suero en el pronóstico
- Uso del análisis de CLLs en suero en la evaluación de la respuesta al tratamiento
Un informe reciente de Katzmann et al2 recomienda la simplificación del algoritmo de diagnóstico de discrasias de células plasmáticas mencionado en las actuales guías del International Myeloma Working Group, indicando que en muchos casos únicamente son necesarios la electroforesis de proteínas séricas (EPS) y el análisis de cadenas ligeras libres (CLLs) en suero Freelite®.
"...because of the small incremental sensitivity provided by urine studies and serum IFE, the use of PEL [SPE] plus FLC provides a simple and efficient initial diagnostic screen for the high-tumour-burden monoclonal gammopathies such as MM [multiple myeloma], WM and SMM [smouldering multiple myeloma]. Urine studies and serum IFE can be ordered more selectively."
Haga click aquí para consultar información sobre pedidos de Freelite® .
Hevylite®* (HLC), un nuevo ensayo de Binding Site ya disponible, promete transformar, al igual que ya ha hecho Freelite®, el manejo de los pacientes con discrasias de célula B.
En resumen los análisis Hevylite® ofrecen:
- Mayor sensibilidad respecto a la electroforesis de proteínas séricas en la cuantificación de inmunoglobulinas monoclonales
- Un resultado cuantitativo con una sensibilidad igual o mayor que la inmunofijación
- Valor clínico al monitorizar pacientes con gammapatías monoclonales
- Ratios HLC, que muestran márgenes de cambio más amplios que las medidas de las inmunoglobulinas monoclonales, debido a que la inmunoglobulina no tumoral permite la evaluación de la inmunosupresión
- Ratios HLC a los que no afectan los cambios en el volumen sanguíneo, hematocritos ni metabolismo variable (a través de receptores FcRn para la IgG). Todo esto afecta a los actuales análisis de inmunoglobulinas séricas
- Ratios HLC que proporcionan información sobre la tasa de muerte selectiva de tumor respecto a la tasa de muerte de células plasmáticas no tumorales. La evaluación de la muerte selectiva de tumor le orientará en la decisión respecto a la quimioterapia más efectiva
Haga click aquí para consultar información sobre pedidos de Hevylite®
¿Qué es Hevylite®?
¿Qué es Hevylite®?|
|
Las moléculas de las inmunoglobulinas intactas contienen epítopos de unión únicos entre las regiones constantes de la cadena ligera y la cadena pesada. Éstas son el objetivo de los anticuerpos Hevylite®. Pueden identificar, por separado, los diferentes tipos de cadena ligera de cada clase de inmunoglobulina (IgGκ, IgGλ, IgAκ, IgAλ, IgMκ, IgMλ). Las moléculas se miden entonces en pares, por ejemplo IgGκ/IgGλ para calcular las ratios de inmunoglobulinas monoclonales respecto a las concentraciones de inmunoglobulinas policlonales de base, de la misma manera que las ratios de cadenas ligeras libres κ y λ se calculan con Freelite®. |
|
Los epitopos diana (en negro) frente a los anticuerpos Hevylite® están en la región constante que se encuentra entre las cadenas ligera y pesada de las inmunoglobulinas |
Como en el caso de los ensayos Freelite®, los reactivos utilizados para producir los tests Hevylite® son anticuerpos policlonales obtenidos de oveja. Las técnicas de inmunización y adsorción están diseñadas para asegurar la ausencia de reactividad cruzada. De esta manera, por ejemplo, los reactivos IgGκ no reaccionan con κ libre o IgGλ, ni con ninguna otra inmunoglobulina.
Hay 4 regiones de epítopos Hevylite® por molécula de inmunoglobulina: una en cada lado de la región de contacto de cada cadena ligera / cadena pesada y otra igual en la parte simétrica de la molécula. Al haber 4 regiones de epítopos por molécula, se forman inmunocomplejos con las inmunoglobulinas del suero del paciente. Esto es necesario para producir inmunoensayos homogéneos y de calidad adecuados para analizadores nefelométricos y turbidimétricos de laboratorio.
Heavy chain / light chain pairs of IgG, IgA and IgM molecules showing the target epitopes for Hevylite® immunoassays in black.
Los análisis típicos para gammapatías monoclonales son la electroforesis de proteínas séricas (SPE o SPEP) y/o electroforesis por inmunofijación (IFE) junto con los inmunoensayos de cadenas ligeras libres en suero. Aún siendo un análisis sencillo y de bajo coste, la SPE no es muy sensible y la cuantificación de proteínas a bajas concentraciones (1-3g/L) es poco precisa.
Esto es especialmente aparente en el caso de IgA monoclonal, ya que su migración electroforética anodal la posiciona sobre otras bandas como la transferrina. Con IFE se consigue una mejor sensibilidad pero IFE es un ensayo no cuantitativo. También se usa la nefelometría para cuantificar inmunoglobulinas, método que es analíticamente preciso en bajas concentraciones. Sin embargo, las muestras de pacientes también contienen inmunoglobulinas policlonales no tumorales de los dos tipos κ y λ, y éstas también están incluidas en el análisis. Esto conlleva resultados clínicamente imprecisos en concentraciones en suero normales.Además, la evaluación de la IgG monoclonal no es fiable a causa del catabolismo variable: los receptores de reciclaje FcRn que se unen a la albúmina y la IgG se saturan o reducen por la quimioterapia.
Rangos normales para Hevylite®
Los rangos indicados a continuación se obtuvieron mediante la determinación de las concentraciones de IgA kappa e IgA lambda del suero de 138 donantes sanos y son únicamente orientativos. Se recomienda, cuando sea posible, calcular los rangos normales locales.
|
Suero adulto normal
|
Valor medio
|
Conc. mediana
|
Rango percentile 95
|
|
IgA kappa (g/L) |
1.24 |
1.19 |
0.48 - 2.82 |
|
IgA lambda (g/L) |
1.00 |
0.98 |
0.36 - 1.98 |
|
IgA kappa/IgA lambda ratio |
1.28 |
1.27 |
0.80 - 2.04 |
Se necesitan rangos que incluyan individuos de más edad, pacientes de hospitales y pacientes con infecciones crónicas y enfermedades autoinmunes. Estudios iniciales han indicado que las relaciones κ/λ Hevylite® en enfermedades con inmunoglobulinas policlonales elevadas se mantienen en los límites estrechos observados en donantes de sangre de la misma manera que las relaciones κ/λ de las cadenas ligeras libres en suero Freelite®.
Monitorización con Hevylite® para obtener información rápida y fiable
Como se puede comprobar en estos estudios de casos, Hevylite® da una indicación temprana de la recaída.
Estudio de caso 1
Ratios Hevylite® (IgAκ/IgAλ) (rosa), densitometría SPE de IgA (rojo) e IgA total por nefelometría (azul). NR:muestra el límite superior del Rango Normal
Al principio este paciente de mieloma múltiple tenía 66g/L de IgA kappa. El paciente respondió bien al tratamiento inicialmente y recibió un transplante celular autólogo. Tanto la IgA monoclonal (cuantificada por densitometría) como la relación de cadenas pesadas libres (HLC) mostraron claramente la reducción en paraproteínas, aunque el ratio no se volvió normal hasta 194 días después de que la proteína monoclonal se volviera negativa por IFE.
La enfermedad residual se identificó 596 días antes usando los ratios IgA kappa/IgA lambda que con la detección por SPE o IFE.
Estudio de caso 2
Ratios Hevylite® (IgAκ/IgAλ) (rosa), densitometría SPE de IgA (rojo) e IgA total por nefelometría (azul). NR:muestra el límite superior del Rango Normal
Un paciente con mieloma múltiple IgG lambda fue estudiado en detalle durante 2 remisiones y recaídas, caso que ilustra las características principales de los ensayos HLC. El ratio HLC dio un mayor rango de valores que la cuantificación de IgG por densitometría o nefelometría, tuvo mayor sensibilidad durante las remisiones, e indicó la recaída antes.
Durante las primeras fases de quimioterapía con ciclofosfamida hubo una muerte selectiva de células tumorales significativa, demostrada por las reducciones en IgG (por densitometría y nefelometría) y el ratio Hevylite®. Tras la recaída el paciente recibió una segunda fase de terapia (C-VAMP), durante la cual las cuantificaciones de IgG indicaron una respuesta tumoral, pero no hubo cambios en el ratio HLC κ/λ, indicando ausencia de muerte selectiva de células tumorales. Posteriormente el paciente murió.
Esto indica que el ratio HLC proporcionó la interpretación correcta de la falta de respuesta a C-VAMP. La discrepancia entre los análisis de IgG total y los ratios de HLC IgG κ/λ puede, en parte, deberse a la inhibición del receptor FcRn por la quimioterapia. Esto crearía una caída en la IgG total (por un turnover celular más rápido) pero el ratio HLC IgG κ/λ no se vería afectado.
- A Dispenzieri et al. International Myeloma Working Group guidelines for serum-free light chain analysis in multiple myeloma and related disorders Leukemia 2009; 23:215-224
- Katzmann et al. Screening Panels for Detection of Monoclonal Gammopathies. Clinical Chemistry 2009;55:8:1517-1522
- Separate nephelometric immunoassays for IgGκ and IgGλ for the assessment of patients with multiple myeloma (MM) - A.R. Bradwell et al.
- Separate nephelometric immunoassays for IgAκ and IgAλ for the assessment of patients with multiple myeloma (MM) - A.R. Bradwell et al.
- Serum immunoglobulin and free light chain abnormalities in non Hodgkin lymphoma - G. Mead et al.
- Serial sample analysis of 3 IgA multiple myeloma patients using a novel immunoassay measuring IgA kappa and IgA lambda - C. Margetts et al.
AR Bradwell
Serum Free Light Chain Analysis (Plus Hevylite®) 5th Edition 2008, Chapter 32, p275-285
El libro está disponible bajo pedido a US $75.
P´ngase en contacto con nosotros.
